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          MDCK細胞宿主蛋白(MDCKCHP)ELISA檢測試劑盒

          更新時間:2023-06-05      瀏覽次數:370

          檢測原理

          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被MDCK細胞宿主蛋白(MDCKCHP抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MDCK細胞宿主蛋白(MDCKCHP呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

          檢測范圍

          標準品(S0-S5)濃度依次為:0、12.5、25、50、100、200 ng/mL

          操作步驟

          1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

          3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 

          4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

          6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

          結果判斷

           繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

          試劑盒性能

          1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

          2.  靈敏度:最-低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

          3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

          4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

          5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

          6.  有效期:6個月


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