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          牛朊病毒 (Prion) ELISA檢測試劑盒 說明書

          更新時間:2023-11-22      瀏覽次數:178

           本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷

          Bovine朊病毒 Prion

          ELISA檢測試劑盒

          使用說明書

          檢測原理

          試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被朊病毒的包被微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測抗,經過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中朊病毒 Prion)的存在與否。

          樣品收集、處理及保存方法

          1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

          2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

          3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

          5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          自備物品

          1. 酶標儀(450nm)

          2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

          3. 37℃恒溫箱

          操作注意事項

          1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完-全溶解后再使用。

          2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

          3.  預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。

          4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

          5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

          試劑盒組成

          名稱

          96孔配置

          48孔配置

          備注

          微孔酶標板

          12孔×8條

          12孔×4條

          陰性對照

          0.5mL

          0.5mL

          陽性對照

          0.5mL

          0.5mL

          樣本稀釋液

          6mL

          3mL

          檢測抗原-HRP

          10mL

          5mL

          20×洗滌緩沖液

          25mL

          15mL

          按說明書進行稀釋

          底物A

          6mL

          3mL

          底物B

          6mL

          3mL

          終止液

          6mL

          3mL

          封板膜

          2張

          2張

          說明書

          1份

          1份

          自封袋

          1個

          1個

           

          試劑的準備

           20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

          洗板方法

          1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

          2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

          操作步驟

          1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          2.  設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

          3.  待測樣本孔加待測樣本10Μl,樣本稀釋液40μL;

          4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

          6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

          結果判斷

           1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                          陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

          2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

          3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

          4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

          試劑盒性能

          1.  準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結果有效。

          2.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

          3.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

          4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

          5.  有效期:6個月

          免責聲明

          1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

            嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。


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